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TGEV
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浒苔多糖体外抗猪传染性胃肠炎病*研究
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TGEV
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#TGEV猪传染性胃肠炎#
「猪传染性胃肠炎(Transmissiblegastroenteri-tis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病*(TGEV)引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病。猪场一旦暴发此病,可造成新生仔猪%死亡,损失相当严重。该病目前尚无有效的治疗药物,采用疫苗免疫接种是主要的预防措施,但现有TGEV疫苗在免疫效果和安全性方面存在着一定的缺陷,所以该病只能对症治疗。应用抗生素易产生耐药性和残留问题,抗生素残留不但导致抗药性的增加,还威胁着人类生命安全,国外将抗生素残留问题作为一种技术贸易壁垒,制约着我国动物性食品的出口。因此,研发天然、低*、无药物残留的绿色生物制剂成为预防和治疗该病的方向之一。」
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EP
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#EP浒苔多糖#
「浒苔(Enteromorpha)俗称苔条、海苔，是绿藻植物石莼科中的水生藻类植物。浒苔作为海域的天然海藻，产量极大，而且大量浒苔生长会对海洋环境造成生态危害，是成本低廉的绿色植物。浒苔多糖是浒苔的关键活性成分，研究表明浒苔多糖具有抑制皮肤癌、抗肿瘤、降血脂、降血糖、抗氧化，抗细菌及免疫调节等功能。浒苔多糖与抗生素相比较具有潜在的应用价值。本试验通过浒苔多糖对TGEV体外抑制作用的研究，为浒苔多糖抗病*作用和浒苔多糖生物制剂开发提供理论基础。」
材料方法
1试验用材料
1.1浒苔多糖：来着青岛海域浒苔中提取
1.2*株与细胞：猪传染性胃肠炎病*-pudue(TGEV-pudue)株、猪睾丸细胞(swinetesticlecell.ST)均由复旦大学医学院病原生物系王玉燕老师惠赠。细胞生长液用含mL/L胎牛血清的DMEM，病*增殖的维持液为含50mL/L胎牛血清的DMEM。
1.3试剂：DMEM(Gibco)、胎牛血清(Gibco)均购自Invirogen公司；胰蛋白酶购自上海生工生物工程技术服务有限公司。
2试验方法
2.1TGEV*力TCID50的测定
将ST细胞进行消化传代，将细胞数调整至1×个/mL，加至96孔细胞培养板中，每孔0.1mL，37℃、体积分数为5%的CO2温箱中培养，待细胞长成单层后，将TGEV进行10*系列稀释，选取适当稀释度，每一稀释度接种96孔板中的8孔，每孔0.1mL，37℃、体积分数为5%的CO2温箱中培养，每隔24h观察CPE情况，至96h。按Reed-Muench公式计算TCID50。
2.2浒苔多糖对ST细胞安全浓度的测定(CPE法）
称取高压灭菌浒苔多糖1g加入20mL细胞维持液中溶解，用细胞维持液作2倍连续倍比稀释，加到长成单层ST的96孔细胞培养板上，0.1mL/孔，每个稀释度重复8孔，另设细胞对照,置37℃、体积分数为5%的CO2温箱中培养96h，每隔12h观察CPE情况，细胞病变率的表示方法：“-”表示无细胞病变;1个“＋”表示10%细胞有病变。根据结果将浒苔多糖用细胞维持液稀释到ST细胞安全浓度范围，再用细胞维持液对安全浓度浒苔多糖作2倍连续倍比稀释。
2.3浒苔多糖直接杀灭TGEV作用的测定
选10个递增稀释度倍比稀释的稀释液分别与等体积0TCID50病*液混合，37℃、体积分数为5%的CO2温箱中作用2h和4h，加到长成单层ST的96孔细胞培养板上，0.1mL/孔，每个稀释度重复4孔，另设细胞对照和病素对照。37℃、体积分数为5%的CO2温箱中培养，每隔4h观察CPE情况，当病*对照CPE达到%时，记录各孔CPE情况。
2.4浒苔多糖抑制TGEV复制作用的测定
先将0TCID50病*液接种至长成单层ST的96孔细胞培养板上，0.1mL/孔，37℃、体积分数为5%的CO2温箱中吸附2h和4h，弃去病*液，加入2倍倍比稀释的浒苔多糖稀释液，0.1mL/孔，每个稀释度重复8孔，另设细胞对照和病*对照。37℃、体积分数为5%的CO2温箱中培养，每隔4h观察CPE，当病*对照CPE达到%时，记录各孔CPE情况。
1.2.5浒苔多糖阻断TGEV吸附作用的测定
选取10个递增稀释度的2倍倍比稀释的浒苔多糖稀释液加到长成单层ST的96孔细胞培养板上，0.1mL/孔，每个稀释度重复4孔。37℃、体积分数为5%的CO2温箱中作用2h和4h，弃去浒苔多糖稀释液，每孔加入0TCID50病*液0.1mL，37℃吸附2h，弃去病*液，加入维持液，另设细胞对照和病*对照。37℃、体积分数为5%的CO2温箱中培养，每隔4h观察CPE，当病*对照CPE达到%时，记录各孔CPE情况。
试验结果
浒苔多糖对ST细胞安全浓度的测定
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根据96h观察CPE结果表明：浒苔多糖稀释到1.57mg/mL对ST细胞的作用与对照组无明显差异，ST细胞的形态均未有明显改变。因此确定浒苔多糖对ST细胞无*性浓度小于1.57mg/mL
试验结果
浒苔多糖对直接杀灭TGEV作用的测定
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浒苔多糖对TGEV具有直接杀灭作用,在ST细胞安全浓度范围内，浒苔多糖对TGEV直接杀灭作用与浒苔多糖浓度和与TGEV直接作用的时间有关。浒苔多糖浓度越高、与TGEV作用时间越长对TGEV直接杀灭作用就越明显，浒苔多糖与TGEV作用2h的最小杀灭浓度为0.2mglmL,作用4h的最小杀灭浓度为0.1mg/mL。
试验结果
浒苔多糖抑制TGEV复制作用的测定
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浒苔多糖对TGEV复制的抑制作用效果不甚明显,但仍有一定效果,在ST细胞安全浓度范围内,浒苔多糖对TGEV复制的抑制作用与浒苔多糖浓度和病*感染细胞的时间有关。浒苔多糖浓度越高效果越明显,TGEV感染细胞时间越长,浒苔多糖对其抑制作用越低。浒苔多糖对TGEV复制的抑制作用的最小浓度为1.57mg/mL。
试验结果
浒苔多糖阻断TGEV吸附作用的测定
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浒苔多糖对TGEV吸附ST细胞阻断作用明显。在ST细胞安全浓度范围内,浒苔多糖的浓度越高,浒苔多糖作用于细胞的时间越长对TGEV阻断作用越明显。浒苔多糖对TGEV吸附ST细胞阻断作用最小浓度与浒苔多糖作用于S细胞的时间有关，2h为0.mg/mL，4h为0.2mg/mL。
本试验结果表明,浒苔多糖对TGEV具有直接杀灭作用,而且多糖浓度越高作用时间越长,直接杀灭作用越好。浒苔多糖对进入细胞内病*抑制作用不明显,原因可能是TGEV进入细胞的速度太快而多糖进入细胞的速度太慢。浒苔多糖对TGEV吸附细胞具有明显的阻断作用,因此浒苔多糖对TGEV在体外具有一定的抑制作用。本试验初步证实浒苔多糖有抗病*的能力,为浒苔多糖在临床上对病*病的预防和治疗提供了理论依据。
数据来源：孙秋艳,沈美艳。浒苔多糖体外抗猪传染性胃肠炎病*的研究。预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇